Найти на портале

       

Авторизация        
E-mail      
Пароль    
Зарегистрироваться       Забыли пароль?

Некоммерческое Партнерство
«Союз Орловского коннозаводства»
   
   
 
Ветеринария » Генетика лошадей  

Контроль происхождения лошадей

Необходимость в проведении работ по генетическому контролю записей происхождения потомков у лошадей очевидна. В частности, она возникает при покрытии кобыл в одном половом цикле двумя жеребцами, случайных спариваниях, искусственном осеменении, при подозрении в умышленной фальсификации происхождения лошадей. Путем такой проверки удается исключить использование на племя особей с ошибочно учтенным происхождением, предупредив тем самым их стихийное родственное и неродственное разведение; повысить достоверность оценки жеребцов-производителей и сохранить генофонд отдельных пород.

Контроль происхождения лошадей проводят по полиморфным белкам, ферментам и группам крови. Однако производство моноспецифических сывороток, необходимых для определения антигенного состава крови лошадей, в СССР не было освоено до 1976 года. В связи с этим изучение групп крови лошадей в нашей стране начато сравнительно недавно. До последнего времени в целях контроля происхождения лошадей использовался метод электрофоретических тестов генетических форм белков крови.

Эффективность контроля происхождения по белкам и ферментам крови высокая — в ряде случаев точность определения достигает 86— 91 % (Дубровская, Стародумов, 1974). Однако этот метод действен только при использовании большого числа исследуемых систем—трансферрина, альбумина, эстеразы, церулоплазмина, преальбумина, карбоангидразы и других.

Наследственный полиморфизм по белкам и ферментам крови у лошадей выражен хорошо, однако, несмотря на это, многими лабораториями мира при контроле происхождения лошадей, как правило, используется ограниченное число систем— не более 3—5. Простые системы (контролирующие их локусы включают не свыше двух аллелей) и белки, определение наследственных типов которых связано с техническими трудностями, используются при контроле происхождения редко и, как правило, в качестве дополнительных маркеров.

В связи с освоением в Институте коневодства производства сывороток-реагентов для определения групп крови у лошадей в нашей стране появилась возможность использования комплексного метода контроля происхождения лошадей, основанного на анализе у исследуемых животных наследственно обусловленных вариантов сывороточных трансферринов, альбуминов, эстеразы и групп крови.

Данный метод в отличие от применяемого до сих пор метода контроля происхождения, предусматривающего исследования у лошадей трех белковых систем, а также шести групп крови достаточно эффективен. Это видно из результатов исследований, проведенных нами на лошадях чистокровной верховой (п-262), донской (п-167), орловской рысистой (п-290) и арабской (п-144) пород, разводимых в заводах Иссык-Кульском, «Восход», Терском, Московском, Пермском, Хреновском.

Значимость отдельных полиморфных систем при контроле происхождения лошадей — неодинаковая. Она находится в прямой зависимости от числа аллельных генов, контролирующих биосинтез конкретных белков, и концентрации аллелей в популяции лошадей. Чем больше аллелей может включать локус, контролирующий белковую систему, и чем больше выровнены величины этих аллелей, тем больший процент ошибок можно определить в записях происхождения.

На всех изученных породах наиболее эффективными при контроле происхождения оказались система трансферрина (ее локус включает пять аллелей) и сложная система D групп крови. При исследовании только одной системы трансферрина можно установить 41,1—49% случаев сомнительного происхождения, а при контроле происхождения по системе D групп крови — несоответствие племенных записей происхождения в 44,2—62,9% случаев из 100 сомнительных. Использование в спорных случаях систем групп крови А, С, К, Р, Q, а также полиморфных белков (альбуминов и эстеразы) дает значительно меньший эффект.

Возможность исключения ошибочного происхождения по одним и тем же системам крови у лошадей разных пород — неодинаковая. Например, по эстеразе у чистокровных верховых лошадей ложное происхождение можно исключить лишь в 3,7 % случаев, в то время как у орловских рысистых—в 34,1%, а у представителей донской и арабской пород—соответственно в 17,1 и 23 %. Использование системы альбумина дает больший эффект на донских (27%) и арабских (27,5%) лошадях, чем на чистокровных верховых (14,1 %). Проверка племенных записей по системе D групп крови у арабских лошадей может исключить ложное отцовство (или материнство) лишь у 44,5 % животных, а по этой же системе у орловских рысистых—у 62,9%. По системе А групп крови можно исключить до 29,4 % случаев ложных записей происхождения у донских и 23,5%—у орловских рысистых лошадей.

По трем полиморфным белковым системам крови—трансферрину, альбумину и эстеразе — удается исключить несоответствие племенных записей о происхождении у донских, чистокровных верховых, орловских рысистых и арабских лошадей соответственно в 58,5; 52,2; 72,9; 67,7% случаев из 100 сомнительных. По шести системам групп крови (А, С, D, К, Р, Q) можно установить; у донских—86% случаев сомнительного происхождения, чистокровных верховых—73,5, орловских рысистых— 84,2, арабских лошадей—73,7 %. Дополнение данных по полиморфным системам трансферрина, альбумина и эстеразы тестами групп крови увеличивает возможность выявления ложного происхождения у донских лошадей до 95,5%, у чистокровных верховых—до 87,6, орловских рысистых—95,6 и арабских—91,8%.

Р.Дубровская, И.Стародумов, Е.Шемарыкин, В.Айнетдинова, Л.Копейкина. ВНИИК.



Иммуногенетический контроль достоверности происхождения племенных лошадей

К настоящему времени во всех странах мира с развитым животноводством введена обязательная проверка достоверности происхождения племенных животных всех видов по группам крови в том числе и лошадей. Практика показывает, что даже в конезаводах с хорошо налаженным племенным учетом встречаются ошибки в достоверности происхождения. Ошибки в происхождении приводят к снижению точности оценки генотипа животных, эффективности отбора и тормозят темпы совершенствования продуктивных и породных качеств животных.

Руководствуясь международными нормами и требованиями по сертификации племенной продукции в Федеральном законе Российской Федерации «О племенном животноводстве» в статье 19 «Сертификация племенной продукции (материала)» включены требования по обязательному проведению иммуногенетической экспертизы происхождения племенных животных четырех видов: крупного рогатого скота, свиней, овец и лошадей. Разработана Государственная программа «Генетическая экспертиза племенной продукции в Российской Федерации», утвержденная МСХ России от 19 мая 1998 года № 291. Для проведения иммуногенетической экспертизы происхождения животных необходимы реагенты, определяющие группы крови.

У нас в стране изучением групп крови лошадей, а следовательно, и генетической экспертизой происхождения занимался и занимается ВНИИ коневодства. Лабораторией иммуногенетики этого института был создан определенный банк реагентов к группам крови (около 15 наименований).

Наряду с этим, мы считаем, назрела необходимость в кратчайшие сроки получить банк реагентов к группам крови лошадей в количествах и объемах необходимых для проведения иммуногенетической экспертизы происхождения в масштабах всей страны. Сделать это можно только современными биотехнологическими методами.

Проведение генетической экспертизы происхождения у племенных лошадей не только крайне необходимо, но и экономически выгодно. Так, по нормативам, установленным Департаментом животноводства и племенного дела МСХ России только в 2002 году контролю достоверности происхождения по группам крови подлежит 20 000 лошадей. Стоимость проведения генетической экспертизы достоверности происхождения 1 лошади составляет в настоящее время около 300 рублей.

Актуальными в коневодстве на сегодняшний день являются и многие другие вопросы: изучение генетических особенностей пород, их филогенеза и породообразования, сходства и различия; выявление генетических аномалий у животных, их происхождения. Всё эти вопросы можно решить при накоплении банка реагентов групп крови и других биопрепаратов.

Если вновь заняться получением реагентов групп крови лошадей общепринятым методом (введение эритроцитов крови от одного животного другому), то этот метод довольно трудоемкий, требующий больших материальных затрат на содержание большого количества лошадей различных пород, а главное - малоэффективный. Для получения необходимого банка реагентов (30-40 наименований) потребуются десятки лет.

Лабораторией иммуногенетики ВНИИ генетики и разведения сельскохозяйственных животных (г. Санкт-Петербург) освоен новый современный биотехнологический метод получения реагентов на гибридомной основе (клеточная инженерия), позволяющий получать высокоспецифические моноклональные антитела практически на любой антиген и в любом количестве, в том числе и к группам крови животных.

Гибридомная технология - менее дорогостоящая и значительно эффективнее общепринятого метода, позволяет ускорить сроки получения необходимого для проведения исследования банка реагентов групп крови до 3-4 лет. Кроме того, гибридомная технология даст возможность обеспечить наработку реагентов к антигенам возбудителей бактериальных, вирусных и паразитарных заболеваний, что позволит проводить более успешные мероприятия по оздоровлению и лечению лошадей.

Для проведения всех этих работ лаборатория располагает необходимым оборудованием, подготовленными специалистами-гибридомщиками для разворачивания работ на первоначальном этапе. Дополнительные затраты необходимы на покупку нового, эксплуатацию и амортизацию используемого оборудования, приборов и реактивов, оплату труда персонала работников и прочих расходов, связанных с затратами на взятие крови, ремонт оборудования, транспортные расходы, оплату электроэнергии и прочих коммунальных услуг, накладные расходы и налоги.

Для проведения работ по генетической экспертизе происхождения лошадей необходим банк реагентов не менее 30-40 наименований, а чтобы получить такой банк даже гибридомной технологией, требуется не менее 3-х лет. Поэтому для организации и проведения работ по получению реагентов групп крови лошадей и других тест-препаратов в объемах и количествах, необходимых для проведения исследований, нужно финансирование в течение 3-х лет, что в 7-8 раз дешевле общепринятого метода. В дальнейшем, при наработке стартового объема реагентов групп крови, затраты на ежегодное их производство не требуется, они будут использованы за счет самоокупаемости. Кроме того, гибридомная технология позволит не только решить проблему производства реагентов групп крови, но и обеспечить наработку других тест-препаратов для нужд коневодства. В частности: тест-препараты для диагностики и лечения наиболее распространенных инфекционных заболеваний; тест-препараты для выявления генетических аномалий и установления их происхождения; тест-препараты для определения жеребости кобыл; тест-препараты для диагностики и регуляции пола у лошадей.

Производство данных тест-препаратов будет можно осуществлять параллельно с получением реагентов групп крови, за счет средств, выделяемых на получение реагентов групп крови.

Сердюк Г., Каталупов Г., "Коневодство и конный спорт" №3, 2002 г.



Идентификация и контроль происхождения лошадей по генетическим маркерам

Метод контроля происхождения лошадей по генетическим маркерам уже широко практикуется во всех странах с развитым коннозаводством и практически является обязательным элементом первичного зоотехнического учета. Благодаря открытию наследственного полиморфизма белков, групп крови лошадей в 70-80-х годах прошлого века, а в последнее десятилетие и микросателлитов ДНК, появилась возможность надежной генетической идентификации каждого животного и достижения максимальной эффективность контроля происхождения.

Зав. лабораторией генетики кандидат с/х наук

Храброва Людмила Александровна


В соответствие с Федеральным законом о племенном животноводстве (1995) и положениями о Государственных племенных книгах (ГПК) обязательному тестированию и контролю происхождения подлежат все племенные лошади заводских пород. Выдача племенных паспортов и запись в ГПК производится на основании заключения лаборатории генетики.

Лаборатория иммуногенетики ВНИИ коневодства была организована в 1979 году и в настоящее время является аккредитированным органом генетической сертификации племенных лошадей. За годы работы в лаборатории накоплена картотека генотипов более 100 тысяч лошадей разных пород, что позволяет не только проводить контроль происхождения животных, но и в необходимых случаях уточнять отцовство и идентифицировать лошадей.

С 1983 года ВНИИ коневодства является членом Международного общества генетики животных (ISAG) и регулярно принимает участие в международных сравнительных испытаниях по тестированию систем крови и ДНК лошадей. В конце 2006 года лаборатория была оснащена современным оборудованием фирмы Applied Biosystems, включая 4-х капиллярный генетический анализатор ABI 3130, и приступила к тестированию лошадей по 17 локусам микросателлитов ДНК.

В настоящее время, в соответствии с рекомендациями ISAG и требованием Международного комитета по племенным книгам (ISBC), большинство лабораторий, занимающихся тестированием лошадей, полностью переходит на типирование по ДНК. И это обусловлено не только правилами обязательного типирования по ДНК лошадей чистокровной верховой и арабской пород, но и высокой эффективностью и экономичностью данного метода. Надежность проведения генетической экспертизы происхождения и уточнения отцовства у лошадей чистокровной верховой по 12-ти микросателлитным локусам ДНК достигает 99,9% и более.

Практика показывает, что неправильные записи в родословных обусловлены самыми разными причинами: плохим первичным учетом, покрытием кобылы двумя и более жеребцами, внешним сходством животных, не исключена возможность и умышленной фальсификации с целью повышения кровности или стоимости лошадей. Поэтому не случайно Международным комитетом по племенным книгам (ISBC) было выдвинуто требование генотипирования чистокровных верховых лошадей по микросателлитам ДНК, чтобы окончательно решить проблему надежности идентификации и контроля происхождения.

Генетическая экспертиза происхождения лошадей по микросателлитам ДНК имеет ряд преимуществ, главное из которых - высокая эффективность, близкая к 100%. Рекомендуемые для генетической экспертизы локусы микросателлитов распределены по всему геному и характеризуются сравнительно высоким уровнем полиморфности, т.е. числом распространенных аллелей. Высокая информативность микросателлитных локусов позволяет успешно использовать их в качестве генетических маркеров для решения широкого круга селекционных задач, включая определение степени гомозиготности, генетического родства по мужской и женской линии, оценки уровня внутрипородной генеалогической дифференциации, а также прогнозирования работоспособности и плодовитости. Для владельцев лошадей и специалистов удобно, что для проведения ДНК-анализа требуется очень небольшое количество биологической ткани, включая кровь, волосяные луковицы, сперму и т.д., при этом выделенная ДНК может годами храниться в замороженном состоянии.

При генетической экспертизе происхождения лошадей используют преимущественно микросателлиты ДНК, которые представляют собой сравнительно короткие повторяющиеся участки динуклеотидных блоков. Именно разработка методики типирования микросателлитных локусов в конце 80-х годов определила последующие успехи в изучении генома человека и животных. На сегодня у лошади уже определена локализиция более 300 микросателлитных локусов и частично картированы все 32 пары хромосом.

Количество динуклеотидных тандемных блоков ДНК у разных организмов, как правило, строго индивидуально и наследуется в соответствии с законами Менделя. Весомым преимуществом микросателлитных локусов является большое число аллелей (в среднем 6-8 на локус) и кодоминантный характер наследования, позволяющий четко отделять гомозиготу от гетерозиготы и контролировать гены, полученные от родителей. С практической точки зрения микросателлиты являются идеальными генетическими маркерами и могут быть использованы для решения ряда стратегических задач селекции.

Современная технология типирования лошадей по ДНК маркерам базируется на использовании фирменного лабораторного оборудования (Applied Biosystems) и специфического набора праймеров для типирования ДНК лошадей (StockMarks). Использование автоматизированного оборудования позволяет проводить генотипирование проб в автоматическом режиме сразу по 17-ти микросателлитным локусам и получать результаты, сопоставимые с данными других лабораторий.

В задачу экспертов входит несколько операций: выделение ДНК из представленного материала (крови или волосяных луковиц) и подготовка проб для анализа; их амплификация с набором праймеров с использованием мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР), денатурация ДНК, проведение электрофореза на генетическом анализаторе и интерпретация полученных результатов. При амплификации ДНК со специальным набором праймеров (которые выполняют функцию генетического шаблона) происходит процесс “отбора” и многократного увеличения нужных участков хромосом. Программное обеспечение ДНК-анализатора позволяет визуализировать процесс лазерной детекции продуктов электрофореза в виде разноцветных графических профилей и выдает на экране монитора результаты генотипирования проб в виде графика аллельных пиков, представленных на рисунке. На заключительном этапе проводится интерпретация полученных результатов, т.е. определение генотипа лошади и проверяется его соответствие указанным родителям.

Рис. 1. Семейный анализ по локусам микросателлитов ДНК

Контроль происхождения лошадей по генетическим маркерам, к которым относятся полиморфным системы белков, группы крови, а также и микросателлиты ДНК, основан на принципе генетического исключения. В соответствии с законами генетики набор генов потомка должен соответствовать генотипам его родителей (так как половина хромосом передается от отца и половина от матери). Следовательно, приплод не может получить и иметь гены, которые отсутствуют у его родителей. Поэтому при генетической экспертизе происхождения на основании установленных у родителей генетических маркеров (типов белков, микросателлитов ДНК) проверяется возможность наличия у лошади протестированного генотипа (т.е. унаследованной пары генов) по каждому из исследуемых локусов. Выявление у потомка “левых” аллелей явно свидетельствует о несоответствии записей о происхождении. Если у жеребенка “не проявляются” аллели отца, делается закономерный вывод о ложном отцовстве. А вот случаи, когда не подтверждается материнский генотип, часто бывают следствием “перепутывания” похожих лошадей в хозяйстве или при транспортировке.

При контроле происхождения лошадей обязательно учитывают генетические особенности пород, наличие у них тех или иных аллелей. Так, например, в результате закрытой системы ведения студбука и интенсивной селекции по работоспособности аллелофонд чистокровной верховой породы оказался довольно консолидированным, и у лошадей этой породы отсутствуют многие аллели микросателлитов ДНК (также как белков, ферментов и групп крови), встречающиеся у полукровных пород.

Владельцев лошадей нередко интересует вопрос, можно ли по крови (или результатам типирования) определить породу или происхождение лошади. Ученые пока еще не выявили породоспецифических маркеров у лошадей, но особенности аллелофонда зарубежных и отечественных пород хорошо изучены и могут быть полезны при определении породной принадлежности. При типировании лошадей арабской породы по микросателлитам ДНК было выявлено около двух десятков дополнительных аллелей, не встречающихся у чистокровных верховых лошадей, а спектр генов изученных локусов у ахалтекинцев оказался еще более разнообразным. Ряд уникальных аллелей микросателлитных локусов был обнаружен у алтайской, башкирской, забайкальской и мезенской.

Для анализа ДНК можно использовать кровь, волосяные луковицы, сперму, слюну и любой другой биологический материал, содержащий хотя бы несколько клеток. Владельцы лошадей явно отдают предпочтение более простому и экономичному методу сбора волосяных “выщипов”, но и эту операцию надо делать правильно.

Для проведения генетической экспертизы по ДНК в лабораторию необходимо доставить 4-5 мл цельной крови, взятой с антикоагулянтом, как и на иммуногенетическое тестирование. В качестве антикоагулянта лучше использовать сухой Трилон Б и лимоннокислый натрий из расчета 35-50 мг на пробирку. Гепарин добавлять не рекомендуется, так как он может оказывать негативное влияние на генотипирование ДНК. При заборе проб крови удобно использовать специальные разовые комплекты для взятия крови (типа BD Vacutainer), состоящие из вакуумной пробирки с антикоагулянтом, стерильной иглы и держателя для пробирки. Пробы крови хранят и транспортируют при низких положительных температурах в течение 3-х суток с момента взятия.

Отбор волосяных луковиц, является наиболее простой процедурой, при этом их можно хранить длительное время в обычных условиях, но обязательно в сухом и темном месте. Свет разрушает цепочки ДНК, поэтому при отправке по почте конверты с образцами волос нужно упаковывать в плотную бумагу или пакет.

При взятии проб волосы и поверхность кожи в зоне гривы обрабатывают спиртом, после чего проводится аккуратное выдергивание волос. Необходимо следить, чтобы на концах взятых волос оставались волосяные луковицы, потому что именно они используются для анализа. От одной лошади необходимо выдернуть не менее 30-40 волос с луковицами. Не следует использовать для взятия и хранения проб полиэтиленовые пакеты, в которых обычно скапливается влага и могут поселяться бактерии и грибки. Нужно защищать волосяные луковицы от света, который разрушает ДНК.

Владельцам следует обратить внимание на правильное оформление сопроводительных документов: для оформления документации и результатов генетической экспертизы это имеет немаловажное значение. Список лошадей для генетического тестирования должен включать номера пробирок с образцами крови или конвертов с волосом и всю необходимую информацию о лошади: порода, пол, кличка, масть, год и место рождения, номер ГПК и клички родителей. Лаборатория проводит тестирование проб только после предварительной оплаты экспертизы. По результатам типирования ДНК лошади лаборатория выдает международный генетический сертификат.

Сегодня лаборатория генетики оказывает владельцам следующие виды услуг:

- Проведение контроля происхождения лошадей по системам крови и ДНК;

- Оформление международного ДНК-сертификата;

- Уточнение происхождения лошади;

- Проведение экспертизы происхождения в спорных случаях;

- Оценка гетерозиготности и породной типичности;

- Тестирование лошадей по генетическим мутациям СSID (комбинированный иммунодефицит), HYPP (периодический паралич), консультации по предупреждению наследственных дефектов;

- Скрининг Babesia equi и микробной контаминации спермы методом ПЦР.


Расценки на генетическое тестирование и контроль происхождения лошадей на 01.01. 2009:

1) Тестирование лошадей по ДНК, включая выдачу Международного сертификата (за 1 гол.)

  • по 17-ти локусам микросателлитов ДНК

1500 руб.

  • Хранение и регистрация проб крови и волос

100 руб.

2 )  Иммуногенетическое тестирование лошадей, включая выдачу заключения о соответствии происхождения

  •  по 8 системам, включая группы крови

500 руб.

3) Иммуногенетическое тестирование лошадей, включая выдачу иммуногенетического сертификата для иностранных владельцев

 

600 руб.

4) Генетическая экспертиза по уточнению происхождения (отцовства или материнства) лошадей

500 руб.

5) Повторное тестирование лошадей:

а) по заказу владельца:    тестирование систем крови

500 руб.

                                         тестирование ДНК

1500 руб.

б) по заказу лаборатории:  тестирование систем крови

300 руб.

                                          тестирование ДНК

1000 руб.


www.ruhorses.ru

»   Спортивные мероприятия
»   Выставки и выводки
»   Магазины для лошади и всадника
»   Ветеринарные аптеки
»   Статьи
»   Музей Лошади
»   Фотоальбом
»   Библиотека
»   Скачать
»   Дневники
»   Форумы
»   Конский рынок
Рейтинг@Mail.ru
Хреновское училище объявляет набор
По направлению конных заводов, ипподромов, коневладельческих хозяйств и других, предприятий
 
2-я Специализированная ярмарка-продажа «ЭКВИРОС Весна - 2011»
31 марта – 3 апреля 2011 г.
ЭКВИРОС дает уникальный шанс заявить о себе!
 
Открытки
Выдающиеся лошади XIX века - Бычок, Летучий и другие - в рисунках со старинных литографий!
Все материалы, находящиеся на сайте www.orlovhorse.ru защищены законом РФ «Об авторских и смежных правах».
Распространение, перепечатывание или публикация материалов с сайта без согласия авторов запрещены.
Разработано ТО "СКиД" 2008-2017 ©
для НП "СОК" 2008-2017 ©